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基因定点突变技术

体外定点突变技术是当前生物学各领域研究中的一种重要实验手段，是改造、优化基因的便捷方案，是探索启动子调节位点的有效手段，也是研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系的有力工具。蛋白质的结构决定其功能，二者之间的关系是蛋白质组研究的重点之一。对某个已知基因的特定碱基进行定点改变、缺失或者插入，可以改变对应的氨基酸序列和蛋白质结构，对突变基因的表达产物进行研究有助于人类了解蛋白质结构和功能的关系，探讨蛋白质的结构/结构域。CRISPR-Cas9系统的靶向双链断裂（DSB），基因组通常通...

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药厂的清洁和消毒措施

对于制药企业而言，当某一产品生产完毕后，总会有一些微生物和少许原辅料残留于设备中，在温度和湿度达到一定程度时，微生物能够与原辅料中残留有机物出现无法物化反应，通过大量繁殖能够形成不同类型代谢物，这些代谢物会从一定程度上影响药物药效甚至会产生毒副作用，从而使制药企业每当生产一段时间或者更换产品后会存在产品质量问题，因此无论维修设备或设备空闲一段时间，需要实现设备清洁工作。对于制药企业来说，清洁主要针对设备中残留的微生物或者各种代谢物，其总量在不影响药品规定的质量、药效及安全性。...

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CRISPR/Cas9 基因编辑和NGS验证

CRISPR/Cas9基因编辑技术需要通过下一代测序(NGS)来验证，能够在核苷酸水平分辨率下进行大规模评估基因编辑的准确性和可靠性。高效、可自动化和可扩展的CIRCLE-seq是一种体外NGS测定，可以对CRISPR介导的切割进行灵敏的脱靶检测。CRISPR/Cas9基因编辑技术CRISPR代表成簇规律间隔的短回文重复序列。这些重复的DNA片段最初来源于病毒病原体，并作为模板将CRISPR相关蛋白9(Cas9)核酸内切酶引导至新入侵的病毒。当Cas9遇到同源病毒序列时，它会...

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HE染色实验中常见问题及应对措施

HE染色实验常见问题及解决方案HE染色是石蜡切片技术中常用的染色方法之一，简称为苏木精-伊红染色法。该方法使用碱性的苏木精染液将细胞核内的染色质和胞质内的核酸染成紫蓝色，同时使用酸性染料伊红将细胞质和细胞外基质中的成分染成红色。1、切片出现白色斑点原因：(1)烘片温度过低，导致玻片未干透；(2)切片在二甲苯中停留时间过短；(3)二甲苯使用时间过长，导致脱蜡不效果不好。对策：若玻片未干透，先用无水乙醇去除水分，再重新脱蜡。若斑点是由于停留时间过短或使用时间过长造成的，则需重新操...

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稳定细胞株的筛选步骤

稳定细胞株是一种常用于基因表达、药物筛选和蛋白质表达等领域的工具。但是，稳定细胞株的筛选需要经过一系列的步骤和实验，下面介绍一下稳定细胞株筛选的两种方法和稳定细胞株的筛选简要步骤：一、质粒转染法先把质粒整合到染色体上后，用相应的质粒DNA中的抗性标志来筛选该细胞系，单克隆筛选稳定细胞株。1、筛选浓度测定，以10~14天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度；2、进行细胞接种，转染实验前天接种细胞，各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞密度应达到60...

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